STM：癌症诊断新技术

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STM：癌症诊断新技术

来自Fred Hutchinson癌症研究中心的研究人员利用液滴数字PCR（ Droplet Digital PCR，ddPCR）技术，首次对一种特殊的肿瘤攻击性免疫细胞进行了定量。这种称之为肿瘤浸润T淋巴细胞（TILs）的T细胞亚群已知可以改善癌症生存率。
这项研究是由Fred Hutchinson癌症研究中心公共健康科学部准会员Jason Bielas所领导，为进一步地探讨TIL定量在免疫治疗中的作用以及作为癌症生存预测指标铺平了道路。研究论文发表在《科学转化医学》（Science Translational Medicine）杂志上。
“现在我们具备了在肿瘤中重现性计数TILs的灵敏度和能力，我们或许能够基于肿瘤TIL计数将患者进行分级，尤其是采用进入市场的免疫疗法给予他们更有效的治疗，”Bielas说。
采用ddPCR定量TILs
在很多癌症类型中TILs直接地攻击肿瘤细胞。尽管TILs的存在及数量与患者生存率增高密切相关，当前的检测最多只能进行半定量。因此，不能利用TILs来做出临床决策。
根据Bielas博士所说，TILs具有一种“可采用数字化方式利用的基因组标记。”这种显示出大量多样性的标记，决定了每个TIL表面表达的T细胞受体（TCR）的克隆性。随着数字RCR的出现，液滴数字PCR可生成数以万计的数据点，现在可以量化这些标记来测定TILs的数量。
Bielas说：“没有比数字PCR更好的方法可以做到这一点。我们现在拥有了大量的引物对和探针：包括45个正向引物，13个反向引物和30个探针。数字PCR可以区分所有的反应，因此你可以在不受PCR效率影响的条件下扩增这些靶标，且不会有任何的竞争性副反应。”
Fred Hutch研究员开发的基于液滴数字PCR的“QuanTILfy”检测利用了Bio-Rad实验室的QX100 ddPCR系统（咨询Bio-Rad，最新QX100 PCR系统技术资料>> >> ）。他们随后利用QuanTILfy对TILs进行了计数，确定了它们的出现率，并开发了一种分型系统来对“克隆性”进行分级，“克隆性”或许是药物可及靶点的一个标记物。
研究的结果
Fred Hutch研究人员对30名卵巢癌患者的原发性肿瘤进行了QuanTILfy测定，这些患者已知生存预后在1-122个月之间。相比于生存期不到2年的患者，生存期超过5年的患者TIL出现率大约高3倍。这些结果表明，高水平TIL与患者生存呈正相关，支持了这一假说：TILs发挥了积极地抑制肿瘤形成作用。研究人员还证实，可以利用QuanTILfy来精确地、可重现性地确定T细胞急性淋巴母细胞性白血病患者T细胞克隆性特征。
QuanTILfy检测被证实敏感且准确。在从血液和正常人类肺成纤维细胞纯化出的人类T细胞混合物中，这一检测能够在10,000个肿瘤细胞中检测到一次TCR重排。重要的是，它也证实了ddPCR技术能够通过多路复用在一次反应中同时定量大量的标记物。